Tento materiál pochází ze staršího archivu rvp.cz a už není součástí aktuální nabídky. Uchováváme ho, aby na něj dál vedly původní odkazy.
Odborný článek
Sledování růstu mikroorganismů
V příspěvku autor popisuje praktické cvičení z mikrobiologie, kdy si žáci vypěstují mikroorganismy na pevných agarových půdách a sledují a porovnávají jejich růst v odlišných podmínkách.
Příspěvek byl převzat z časopisu Biologie-chemie-zeměpis, časopisu pro výuku přírodovědných předmětů na základních a středních školách, vydávaného SPN - pedagogické nakladatelství, a.s.
Mikroorganismy potřebují ke svému růstu vlhkost a vhodnou teplotu. Ta závisí na druhu pěstovaného mikroorganismu (teplomilné nebo chladnomilné druhy) a většinou se pohybuje v určitém rozmezí. Pokud jsou mikroorganismy pěstovány při teplotě, která je mimo toto rozmezí, jejich růst se zpomaluje nebo zastavuje.
Cíl:
prokázat vliv teploty a vlhkosti na růst mikroorganismů
vzorek mikroorganismu (kvasinky nebo nejrůznější druhy bakterií vypěstované v čisté kultuře)
Hotové sterilní agarové půdy v plastových Petriho miskách lze použít např. od firmy Dioxo (viz internetové stránky www.oxoid.cz). Půda s univerzálním použitím umožňující růst širokého spektra mikroorganismů je např. Nutrient Agar (připravená půda v plastových Petriho miskách má firemní kód PO5025A) nebo Tryptone Soya Agar (připravená půda v plastových Petriho miskách má firemní kód PO5012A). Pro pěstování kvasinek a plísní je vhodný např. Sabouraud Dextrose Agar (připravená půda v plastových Petriho miskách má firemní kód PO5001A). Tyto Petriho misky jsou určené pro jedno použití a pracujeme s nimi bez jakékoli předchozí úpravy. U stejné firmy lze zakoupit i živné půdy v prášku pro vlastní přípravu agarových půd. Plastové Petriho misky a další laboratorní materiál dodává např. firma P-lab (viz internetové stránky
Každý žák ve skupině naočkuje svoji agarovou půdu v Petriho misce stejným mikroorganismem, přičemž každá skupina si zvolí jiný druh mikroorganismu. Lepší je zvolit naočkování čistou kulturou, která obsahuje jeden druh mikroorganismu. Ve směsné kultuře poroste každý druh při různé teplotě jinou rychlostí a je velmi obtížné tento stav vyhodnotit. Očkování provádíme tak, že na sterilní vatový tampon (nebo mikrobiologickou kličku) nabereme malé množství vzorku a na agarovou půdu jím zlehka nakreslíme klikatou čáru (do agaru neryjeme). Každý žák ve skupině bude svoji agarovou půdu (přikrytou víčkem, obrácenou dnem vzhůru a označenou jménem permanentním fixem na dně misky) pěstovat při jiné teplotě podle možností dané třídy (při pokojové teplotě, v chladu na chodbě nebo ve skladu, v ledničce, v mrazáku, v inkubátoru při teplotě vyšší, než je teplota pokojová atd.). Teplotu, při které mikroorganismus pěstuje, změří, zaznamená do protokolu a pravidelně kontroluje. Mikroorganismy pěstujeme několik dní (např. jeden týden). Ideální je, pokud mohou žáci podle svého zájmu v průběhu této doby agarové půdy několikrát zkontrolovat a sledovat postupný nárůst mikroorganismů. V každé skupině může jeden žák nechat svoji agarovou půdu trochu poodkrytou při pokojové teplotě, aby mohl skupině demonstrovat růst mikroorganismu při minimální vlhkosti (agarová půda úplně vyschne).
Hodnocení
Po několika dnech žáci ve skupině svoje výsledky porovnají a rozhodnou, při které teplotě jejich mikroorganismus rostl nejlépe, tzn. vytvořil největší kolonie. Každá skupina bude svoje výsledky prezentovat zbytku třídy. Na Petriho misce, která nebyla dobře přikrytá a vyschla, by neměly růst žádné mikroorganismy, protože neměly k růstu potřebnou vlhkost.
Růstová křivka plísní
Plísně mají charakteristický růstový cyklus, který lze dobře pozorovat pouhým okem. Po naočkování na agarovou půdu dochází k nárůstu kolonie, u některých druhů se mohou v závěru růstu vytvořit zřetelně viditelné výtrusy. Poté celá kolonie odumírá.
Cíl:
pozorovat charakteristický růstový cyklus plísní, graficky znázornit růstovou křivku plísně
Materiál a pomůcky:
sterilní agarové půdy v plastových Petriho miskách (pro pěstování plísní je vhodný např. Sabourand Dextrose Agar - viz předchozí návod v tomto článku)
sterilní vatové tampony
permanentní fix, vzorek plísně (z různých druhů sýrů, kompotů, jiných potravin nebo plíseň, která se objeví na agarové půdě jako nežádoucí kontaminace při předchozích pokusech)
Pracovní postup
Doprostřed agarové půdy sterilním způsobem naočkujeme malé množství vzorku. Každý žák (popř. skupina) by si měl zvolit jiný druh plísně, protože každá plíseň má trochu odlišný růstový cyklus, a proto je vhodným objektem pro porovnávání mezi jednotlivými žáky. Petriho misku si označí permanentním fixem, zavře ji víčkem a obrácenou dnem vzhůru nechá při pokojové teplotě. Agarové půdy kontrolujeme denně (plísně rychle rostou), zaznamenáme si vzhled plísně a změříme její průměr. Po skončení pokusu seznámí jednotlivci nebo skupiny se svými výsledky ostatní žáky a porovnají je mezi sebou. Jinou variantou tohoto pokusu je sledování růstu stejného druhu plísně, ale při různých teplotách (obdobně jako v předchozím pokusu v tomto článku). Postup práce, hodnocení a sestrojení růstové křivky je obdobné.
Hodnocení
Na agarových půdách pozorujeme velké, často vláknité kolonie, které postupem času mění tvar i barvu. Růst kolonie končí po několikadnech úhynem plísně, popř. vytvořením výtrusů. Růstovou křivku můžeme vyjádřit graficky vynesením hodnot průměru kolonie (v cm nebo mm) v závislosti na čase (ve dnech). Výtrusy plísní můžeme pozorovat mikroskopem v kapce vody nebo je můžeme zkusit naočkovat na novou agarovou půdu, a vypěstovat tak znovu kolonii dané plísně.
Janderová, J. - Zikánová, B.: Náměty pro laboratorní cvičení z biologie (1) - mikrobiologie (1. část). Biologie - chemie - zeměpis, 2000, ročník 9, č. 2, s. 66 - 69. Kaprálek, F.: Mikrobiologické praktikum. Praha: Karolinum, 1999, ISBN 80-7184-927-8. Malachová, K.: Cvičení z obecné mikrobiologie. Ostrava: Ostravská univerzita, 1992, ISBN 80-7042-696-9. Pavelková, J. - Zikánová, B.: Náměty praktických cvičení s využitím mikroorganismů (2). Biologie - chemie - zeměpis, 2004, ročník 13, č. 3, s. 122 - 126. Pavelková, J. - Zikánová, B.: Náměty praktických cvičení s využitím mikroorganismů (1). Biologie - chemie - zeměpis, 2003 ročník 12, č. 5, s. 226 - 229.
Literatura a použité zdroje
JANDEROVÁ, J; ZIKÁNOVÁ, B. Náměty pro laboratorní cvičení z biologie (1) - mikrobiologie (1. část) Biologie - chemie - zeměpis. 2000. 66 s.
KAPRÁLEK, F. Mikrobiologické praktikum. Praha: Karolinum, 1999. ISBN 80-7184-927-8.
MALACHOVÁ, K. Cvičení z obecné mikrobiologie. Ostrava: Ostravská univerzita, 1992. ISBN 80-7042-696-9.
PAVELKOVÁ, J; ZIKÁNOVÁ, B. Náměty praktických cvičení s využitím mikroorganismů (2). Biologie - chemie - zeměpis. 2004. 122 s.
PAVELKOVÁ, J; ZIKÁNOVÁ, B. Náměty praktických cvičení s využitím mikroorganismů (1). Biologie - chemie - zeměpis. 2003. 226 s.
