Kultivační důkaz mikroorganismů v okolním prostředí
Archivní obsah
Tento materiál pochází ze staršího archivu rvp.cz a už není součástí aktuální nabídky. Uchováváme ho, aby na něj dál vedly původní odkazy.
Odborný článek
Kultivační důkaz mikroorganismů v okolním prostředí
V příspěvku autor popisuje praktické cvičení z mikrobiologie, kdy si žáci vypěstují mikroorganismy na pevných agarových půdách a potom je pozorují pouhým okem i pod mikroskopem.
Příspěvek byl převzat z časopisu Biologie-chemie-zeměpis, časopisu pro výuku přírodovědných předmětů na základních a středních školách, vydávaného SPN - pedagogické nakladatelství, a.s.
Mikroorganismy demonstrujeme v hodinách přírodopisu a biologie většinou tak, že je pozorujeme mikroskopem. Další možností je nechat žáky, aby si sami vypěstovali mikroorganismy na pevných agarových půdách. Tímto způsobem se dají pěstovat bakterie, kvasinky i plísně.
Cíl
Namnožit mikroorganismy do takového množství, aby byly viditelné pouhým okem, a tím dokázat jejich přítomnost v okolním prostředí. Dalším cílem může být namnožení mikroorganismů k jiným praktickým cvičením.
Hotové sterilní agarové půdy v plastových Petriho miskách lze použít např. od firmy Dioxo (viz internetové stránky www.oxoid.cz). Půda s univerzálním použitím umožňující růst širokého spektra mikroorganismů je např. Nutrient Agar (připravená půda v plastových Petriho miskách má firemní kód PO5025A) nebo Tryptone Soya Agar (připravená půda v plastových Petriho miskách má firemní kód PO5012A). Pro pěstování kvasinek a plísní je vhodný např. Sabouraud Dextrose Agar (připravená půda v plastových Petriho miskách má firemní kód PO5001A). Tyto Petriho misky jsou určeny pro jedno použití a pracujeme s nimi bez jakékoliv předchozí úpravy. U stejné firmy lze zakoupit i živné půdy v prášku pro vlastní přípravu agarových půd. Plastové Petriho misky a další laboratorní materiál dodává např. firma P-lab (viz internetové stránky
Agarovou půdu v Petriho miskách kontaminujeme nejrůznějším způsobem - každý žák si vybere jednu z možností. Alespoň jednu Petriho misku necháme bez kontaminace jako negativní kontrolu (stačí jedna pro celou třídu). Každý žák si označí svou Petriho misku na spodní straně permanentním fixem.
Možnosti kontaminace - příklady:
na agarovou půdu nasypeme několik zrníček zahradní zeminy
Petriho misku otevřeme a necháme odkrytou různě dlouhou dobu (např. 1 minutu nebo 10 minut)
na agarovou půdu kýchneme
na agarovou půdu otiskneme nějaký běžný předmět, minci, prsty, kapesník
na agarovou půdu rozetřeme pár kapek vody (vodovodní, rybniční, z akvária)
na agarovou půdu rozetřeme pár kapek kyselého mléka nebo jiných mléčných výrobků, zoctovatělého piva nebo vína
na agarovou půdu rozetřeme malé množství kvasnic
na agarovou půdu rozetřeme malé množství plísní (ze sýrů typu hermelín nebo niva, z kompotů nebo jiných potravin)
Kontaminované agarové půdy na spodním víčku Petriho misky necháme při pokojové teplotě na tmavém místě a prohlédneme po několika dnech - nejlépe po jednom až dvou týdnech. Vhodné je, pokud mají žáci k agarovým půdám volný přístup a mohou kontrolovat postupný nárůst mikroorganismů (třeba o přestávkách).
Hodnocení
Na agarových půdách si všímáme množství a rozmanitosti narostlých kolonií mikroorganismů. Namnožili jsme je do takového množství, že jsme schopni vidět je pouhým okem, a tím jsme prokázali jejich přítomnost v okolním prostředí. V Petriho misce, která byla nechána bez kontaminace, by neměly být žádné kolonie. Takto získaný biologický materiál můžeme dále makroskopicky (pouhým okem) i mikroskopicky hodnotit, popřípadě ho dále pěstovat po přeočkování na novou agarovou půdu.
Makroskopické hodnocení
Každý žák si vybere jakékoli 3 kolonie ze své Petriho misky a zjistí u nich velikost v mm, barvu, tvar, typ povrchu, typ okraje. Výsledky zaznamenává do tabulky.
Tabulka 1 Makroskopické hodnocení kolonií mikroorganismů (údaje se týkají celé kolonie)
kolonie č.
velikost (mm)
barva
tvar
povrch
okraj
1
2
3
Mikroskopické hodnocení
Vzorky kolonií, které žáci makroskopicky hodnotili, pozorují mikroskopem v kapce vody. Všímají si pohyblivosti (ano/ne) a tvaru buňky (koule, tyčinka, popřípadě spirála). Výsledky zaznamenávají do tabulky 2.
Tabulka 2 Mikroskopické hodnocení buněk přítomných v jednotlivých koloniích (údaje se týkají jedné buňky, která je součástí dané kolonie)
kolonie č.
pohyblivost
tvar buňky
1
2
3
Přeočkování na novou Petriho misku
Vzorek vybrané kolonie naočkujeme na čerstvý agar, a vypěstujeme tak čistou kulturu, která obsahuje pouze jeden druh bakterií. Tuto kulturu můžeme použít k práci v příštím laboratorním cvičení a pozorovat ji např. po obarvení.
Postup přeočkování
Sterilně odebereme kousek kolonie mikrobiologickou kličkou (předtím vyžíhanou v plameni kahanu a ochlazenou) nebo sterilním vatovým tampónem a na povrch nové agarové půdy zlehka nakreslíme klikatou čáru. Do agaru neryjeme. Petriho misku ihned zakryjeme víčkem, obrácenou dnem vzhůru a řádně označenou permanentním fixem necháme při pokojové teplotě několik dnů.
Janderová, J. - Zikánová, B.: Náměty pro laboratorní cvičení z biologie (1) - mikrobiologie (1. část). Biologie - chemie - zeměpis. 2000, ročník 9, č. 2, s. 66 - 69. Kaprálek, F.: Mikrobiologické praktikum. Praha: Karolinum, 1999, ISBN 80-7184-927-8. Malachová, K.: Cvičení z obecné mikrobiologie. Ostrava, Ostravská univerzita, 1992, ISBN 80-7042-696-9. Pavelková, J. - Zikánová, B.: Náměty praktických cvičení s využitím mikroorganismů (1). Biologie - chemie - zeměpis. 2003, ročník 12, č. 5, s. 226 - 229. Pavelková, J. - Zikánová, B.: Náměty praktických cvičení s využitím mikroorganismů (2). Biologie - chemie - zeměpis. 2004, ročník 13, č. 3, s. 122 - 126.
Literatura a použité zdroje
JANDEROVÁ, J; ZIKÁNOVÁ, B. Náměty pro laboratorní cvičení z biologie (1) - mikrobiologie (1. část).
KAPRÁLEK, F. Mikrobiologické praktikum. Praha: Karolinum, 1999. ISBN 80-7184-927-8.
MALACHOVÁ, K. Cvičení z obecné mikrobiologie. Ostrava: Ostravská univerzita, 1992. ISBN 80-7042-696-9.
PAVELKOVÁ, J; ZIKÁNOVÁ, B. Náměty praktických cvičení s využitím mikroorganismů (1). Biologie - chemie - zeměpis. 2003. 226 s.
